Лактобактерии, определение ДНК (Lactobаcillus spp., DNA) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Количественное определение ДНК Lactobacillus spp. в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».    

В настоящее время известно более 150 видов лактобацилл. В различных биотопах человека обитает около полутора-двух десятков видов. У женщин репродуктивного возраста нормофлора влагалища представлена преимущественно 5-6 видами Lactobacillus spp., которые составляют основу микробиоценоза. Данное исследование выявляет L. iners, L. crispatus, L. jensenii и L. gasseri - основные виды лактобактерий, колонизирующие влагалище, а также L. acidophilus, L. reuteri, L. delbrueckii, L. helveticus, L. fermentum, L. bulgaricus, L. casei, L. paracasei, L. rhamnosus, L. salivarius и L. johnsonii, применяемые в качестве пробиотиков. 

Абсолютное количество лактобацилл может колебаться в достаточно широких пределах и требует количественной оценки. По данным разных авторов количество лактобацилл во влагалище здоровой женщины варьирует от 10^5 до 10^9 КОЕ/мл, что составляет от 90 до 99,9% всей микрофлоры влагалища. 
Лактобактерии оказывают существенное влияние на процессы обмена веществ, обеспечивают организм человека витаминами группы В, С, К, никотиновой и фолиевой кислотами, биотином, вырабатывают аминокислоты, молочную, уксусную и другие органические кислоты, антибиотико- и гормоноподобные вещества, перекись водорода, L. fermentum № 90T-C4 продуцирует эндогенный лизоцим. 

Выраженный дисбиоз влагалища – состояние микробиоценоза, характеризующееся значительным снижением доли лактобактерий (менее 20% от всех выделенных микроорганизмов) или полных их отсутствием. Выявление низкого содержания лактобактерий само по себе не является основанием для заключения о наличии какого-либо заболевания, ассоциированного с нарушением состава микрофлоры, однако указывает на его высокую вероятность и требует подтверждения, основанного на результатах анализа клинических данных и/или выявления условно-патогенных бактерий в концентрации, имеющей диагностическую значимость.

Аналитические показатели:
Определяемый фрагмент - специфичный участок ДНК Lactobacillus spp.
Специфичность определения –100%.
Чувствительность определения - 100 копий ДНК Lactobacillus spp. в образце.

В тесте также проводится определение содержания общей бактериальной массы (ОБМ) и контроля взятия материала (КВМ)- тест на содержание ДНК гена HMBS человека.

Обсемененность и видовой состав исследуемого биотопа урогенитального тракта женщины зависит от фазы менструального цикла.

Обследование женщин целесообразно проводить в первую половину менструального цикла, не ранее 5 –ого дня. Допустимо обследование во второй половине цикла, не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации. При наличии выраженных симптомов воспаления, взятие материала проводится в день обращения.

Накануне и в день обследования пациентке не рекомендуется выполнять спринцевание влагалища. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии (общей / местной), применения пробиотиков и эубиотиков, ранее 24-48 часов после полового контакта, интравагинального УЗИ и кольпоскопии.

Рекомендуется брать материал не ранее, чем через 14 дней после применения антибактериальных препаратов и местных антисептиков, и не ранее, чем через 1 месяц после применения антибиотиков перорально.

Если для исследования берут соскоб из уретры, сбор материала проводят до или не ранее 2 - 3 часов после мочеиспускания

• Профилактическое обследование. 
• Обследование при беременности. 
• Подозрение на дисбактериоз. 
• Контроль адекватности назначенного лечения.

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Лактобактерии: результат выдается в абсолютных и относительных единицах. 
• Абсолютное значение - lg (десятичный логарифм) копии/проба. Референсные значения в норме не менее 5 lg копии/проба (не менее 10^5 копий ДНК Lactobacillus spp. в пробе). 
• Относительное значение - % содержания от общей бактериальной массы (ОБМ). Референсные значения: в норме не менее 80% от общей бактериальной массы. 

Результат «не обнаружено»:
в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных Lactobacillus spp. или концентрация в пробе ниже границы чувствительности теста.

ОБМ, общая бактериальная масса: результат выдается в абсолютных единицах lg (десятичный логарифм) копии/проба. Референсные значения: в норме ОБМ не менее 5 lg копий/проба (не менее 10^5 копий ДНК ОБМ в пробе). 

В случае, когда значение ОБМ ниже референсного, содержание бактериальной ДНК в образце недостаточно для количественного анализа, результат по Lactobacillus spp. выдается в виде «обнаружено» или «не обнаружено». В относительных единицах результат не подсчитывается. 
Возможны как патологические, так и физиологические причины снижения ОБМ. Низкое содержание ОБМ, может быть связано с такими причинами, как антибиотикотерапия, возрастные изменения, гормональные нарушения и т.п. Поэтому даже при соблюдении всех преаналитических требований в качественно полученной пробе может присутствовать мало бактерий.

КВМ, контроль взятия материала. 
Количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце не менее 4 lg копий/проба (не менее 10^4 копии ДНК гена HMBS человека в пробе): достаточное для анализа количество биоматериала. Количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце менее 4 lg копий/проба: НЕ достаточное для анализа количество биоматериала. В этом случае невозможно точное количественное определение Lactobacillus spp. и ОБМ, а так же подсчет относительных значений Lactobacillus spp. в случае нормального содержания ОБМ. Если исключены физиологические и патологические причины сниженного количества эпителиальных клеток в образце - следует повторить анализ, начиная со стадии взятия материала. 
Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.